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細胞趨化實驗的工作流程

更新時間:2023-08-24   點擊次數:551次

細胞趨化實驗的工作流程

ibidi


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ibidi Chemotaxis 2D and 3D細胞趨化載玻片


可視2D/3D細胞趨化實驗流程:

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開始實驗前

必要設備

基本要求:

倒置相差顯微鏡(推薦5倍或10倍物鏡)

用于延時圖像采集的相機

Stage Top培養箱(大多數哺乳動物細胞類型需要)


推薦擴展:

用于并行圖像采集的電動載物臺

自動對焦



1.樣品制備

步驟

使用ibidi µ-Slide Chemotaxis細胞趨化載玻片,可以進行具有定義的趨化梯度的可重現的趨化性測定。


首先,細胞接種,這可以在2D或3D環境中完成。孵育和細胞附著后,根據確定的加載方案,用趨化劑填充滿每個腔室的兩個儲液池。

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ibidi 的解決方案

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µ-Slide Chemotaxis 包含3個獨立的腔室,用于使用緩慢或快速遷移的細胞進行平行趨化性測定。


它允許在可重現的環境中創建精確定義的、穩定的趨化梯度。



2.活細胞成像

步驟

生理條件下的活細胞成像能夠詳細記錄細胞隨時間的遷移,這是正確分析趨化性測定所必需的過程。


成像周期的持續時間取決于細胞類型(例如,快速遷移的白細胞或緩慢遷移的腫瘤細胞或成纖維細胞)和環境條件(例如,趨化劑的類型和濃度)。用于緩慢遷移細胞的典型視頻顯微鏡設置包括在24小時內每 2.5-10分鐘拍攝一張照片。


由于每個實驗最佳地包含來自20-40個單細胞的跟蹤數據,因此應使用低倍顯微鏡物鏡,例如4倍或10倍。

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MDA-MB-231 人乳腺癌細胞在膠原凝膠中遷移的延時顯微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作為趨化劑觀察細胞 24小時。生理條件由ibidi加熱和氣體培養系統維持。


ibidi的解決方案

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ibidi Stage Top Incubators ibidi加熱和氣體培養系統提供顯微鏡下的生理環境,可在短期和長期趨化性測定期間實現活細胞成像。




3.細胞追蹤

步驟

通常趨化性測定的活細胞顯微鏡檢查會創建時間圖像堆棧,其中每個圖像顯示特定時間點的確切細胞位置。


為了量化它們的運動,通過確定它們在圖像堆棧的每一幀上的位置來跟蹤單個細胞。跟蹤可以手動完成,也可以使用特殊軟件自動完成。之后,每個跟蹤單元格 (x, y)的位置值可用于每個時間點(t)并可以進一步分析。

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使用ImageJ手動跟蹤插件跟蹤后的細胞跟蹤可視化。


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跟蹤后ImageJ手動跟蹤插件的輸出;具有每個時間點(t)的每個被跟蹤單元(x,y)的位置值的數據表。


ibidi的解決方案

自動跟蹤和數據分析:

MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI Image Analysis圖像分析是一種基于AI的自動圖像分析解決方案,用于趨化性測定?;诰W絡的軟件將快速而強大的細胞跟蹤與人工智能 (AI) 相結合,無需標記即可進行客觀且可重復的分析。只需將您的數據上傳到您的FastTrack AI帳戶,即可開始分析工作。在1到2小時內,您將收到一份詳細的報告供下載和進一步評估。

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手動跟蹤:

ImageJ手動跟蹤插件有助于在趨化性測定中手動跟蹤細胞遷移。

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4.數據分析
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趨化性測定數據分析步驟:

數據繪圖

定量與統計分析

數據解釋


訂購信息:

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